DGiNaSPTM系統(tǒng)工作流程:單細(xì)胞分離到NGS分析
流程特點:
· 更低成本:靶向基因檢測,避免看家基因占用的大量測序數(shù)據(jù),大大節(jié)省了測序和分析成本;
· 罕見轉(zhuǎn)錄本更高檢出率:靶向定制panel,選定特定基因組合,提高UMI計數(shù)效率,罕見轉(zhuǎn)錄本檢測閾值更低;
· 超高細(xì)胞捕獲效率:大于60%,遠(yuǎn)高于市場上目前所有大通量單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù);
· 克服PCR擴增偏差:引入單細(xì)胞測序金標(biāo)準(zhǔn),分子標(biāo)簽,降低非特異性表達;
· 實現(xiàn)更高的分辨率:可以分辨更精細(xì)、微觀的細(xì)胞群和細(xì)胞亞種群;
· 反轉(zhuǎn)錄的磁珠超長穩(wěn)定存儲:完整cDNA可在磁珠微球結(jié)構(gòu)保存長達16周,隨用隨?。?/span>
· 靈活分樣組合:單次實驗,通過獨特的抗體標(biāo)記的方法,既可以提高樣品通量(*多可8個樣本同時建庫,可等分,可隨機組合);又可以同時進行單細(xì)胞蛋白和轉(zhuǎn)錄組聯(lián)合檢測,大大降低成本的同時,也為單細(xì)胞多組學(xué)研究提供了更高效的平臺
靶向設(shè)計
近年來高通量測序平臺的快速發(fā)展引發(fā)了測序成本迅速激進的成本降低,但相對于大量的單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組分析需求來說仍是十分昂貴的。我們通過特殊序列設(shè)計的方法,開發(fā)出了多款適用于不同客戶需求的靶向基因檢測試劑盒。具有以下優(yōu)點。
l 更低成本--提高單細(xì)胞測序效率,避免看家基因占用的大量測序數(shù)據(jù),大大節(jié)省了測序和分析成本;
l 罕見轉(zhuǎn)錄本更高檢出率--選定特定基因組合,提高UMI計數(shù)效率,罕見轉(zhuǎn)錄本檢測閾值更低;
l 定制化—提供客戶定制化服務(wù),專門的設(shè)計軟件和應(yīng)用專家提供專業(yè)的設(shè)計指導(dǎo)和服務(wù)
l 儲存--從樣本中得到的完整 cDNA 可在磁珠上穩(wěn)定存儲,允許將珍貴樣本保存長達 16 周。這可使用戶在時間允許的情況下靈活地對樣本進行測序,并通過對儲存的磁珠池進行等分或分樣來實現(xiàn)同一樣本的多個測定。
l 分樣--在磁珠上儲存的 cDNA可以分成一個或多個等分試樣,并使用定制或預(yù)先設(shè)計的組合(panel)進行擴增。通過提供對部分樣本進行測序的選項和對樣本不同組合(panel)進行測試的靈活性,進一步降低成本。
分子標(biāo)記索引
當(dāng)對序列讀取進行計數(shù)時,PCR 擴增偏差可導(dǎo)致基因定量不準(zhǔn)確。DGiNaSPTM分子標(biāo)簽(UMI)技術(shù)為單個細(xì)胞的單個基因分配了獨特的分子索引,也稱為“分子條形碼”。實驗者可借此克服擴增偏差,更準(zhǔn)確地計算轉(zhuǎn)錄水平。

磁珠上分子標(biāo)簽結(jié)構(gòu)。Univ:通用Illumina接頭序列。CL:Cell specific sequence細(xì)胞特異序列。大約有88.5萬種細(xì)胞標(biāo)記。UMI:Unique molecular index。每個mRNA分子有相同標(biāo)簽。UMIs種類:約6.6萬。Poly-dT:mRNA尾連接。
單分子標(biāo)記流程示意圖
我們?yōu)榭蛻籼峁┒喾N數(shù)據(jù)分析安裝分析軟件和可視化工具,可構(gòu)建完全自動化的數(shù)據(jù)分析通道。只需對簡單的生物信息學(xué)基本了解即可方便的進行初級分析和二級分析以及數(shù)據(jù)可視化等各種數(shù)據(jù)分析和挖掘,直接生成可用于發(fā)表的結(jié)果和圖片
工作條件:
電壓要求:100-240 Vac, 50-60 Hz, 25 W;
溫度要求:16-28°C;
濕度要求:室溫,不高于85%;
具體參數(shù)
芯片適用樣品類型:一種微流體芯片兼容不同大小及不同類型的真核細(xì)胞(貼壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞、組織、血液等);
樣本處理通量:反應(yīng)孔數(shù)量達到了22萬個,1-8個通道,單個通道每次可捕獲100-10000單細(xì)胞;
完全自動化:一體化主機設(shè)置,可從細(xì)胞分離到建庫完成需要12.5小時,所有步驟均在一個單元完成實現(xiàn)全自動分離建庫,實現(xiàn)快速裂解細(xì)胞對基因表達影響*小,**地獲得轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù);
分區(qū)與標(biāo)簽數(shù):每次運行產(chǎn)生≥9萬個納升級分區(qū),含有不少于270 萬個獨特的序列標(biāo)簽、**標(biāo)簽或ATAC標(biāo)簽(每個標(biāo)簽由16個堿基構(gòu)成);
細(xì)胞捕獲效率:在樣本細(xì)胞群體中捕獲≥60%的單細(xì)胞,每 1000 個細(xì)胞中含有 雙細(xì)胞的比例低于0.9%;
文庫測序儀兼容性:系統(tǒng)提供 Illumina和華大基因兼容測序文庫,建庫樣本滿足 Illumina 和華大基因測序儀要求;
細(xì)胞直徑大?。?/b>≤40um;大于40um抽提細(xì)胞核檢測試劑盒;
多樣本標(biāo)記: 配套原廠試劑,可以完成細(xì)胞樣本及細(xì)胞核樣本混樣建庫,細(xì)胞樣本混樣單個通道達到10種樣本標(biāo)簽,細(xì)胞樣本或細(xì)胞核樣本混樣單次實驗可達到80個樣本建庫實驗;
條碼掃描器: 配備2D 條形碼掃描器,掃描試劑信息并跟蹤試劑使用情況;
軟件包括:分析軟件和可視化軟件,免費安裝,免費升級,自帶誤操作提示及更正功能,支持 Wifi,以太網(wǎng),USB 接口輸出,兼容 LIMS 系統(tǒng);
目前已有多款經(jīng)驗證的試劑盒可選:
□ 單細(xì)胞的基因 3’表達譜測序文庫試劑盒
□ 單細(xì)胞的基因5’表達譜測序文庫試劑盒
□Onco-BC 靶向檢測試劑盒(panel)--與乳腺癌和**細(xì)胞相關(guān)的 400 個基因檢測
□ **反應(yīng)檢測試劑盒(panel)--**細(xì)胞類型譜分析
□ T-細(xì)胞靶向檢測試劑盒(panel)--T細(xì)胞類型譜分析
□ 單細(xì)胞核的ATAC-Seq測序文庫試劑盒
□ 多聚甲醛固定后單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序文庫試劑盒
□ 客戶自定義檢測試劑盒(panel)--用戶可選擇100-500個靶基因進行檢測,專業(yè)的應(yīng)用工程師將為您的設(shè)計提供技術(shù)支持