彗星試驗(yàn)（Comet assay）, 又稱單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)（Single cell gel electrophoresis, SCGE），是在核酸沉淀法（Nucleoid sedimentation）和暈圈分析（Holo assay）等檢測技術(shù)基礎(chǔ)上逐步發(fā)展起來的一種在單細(xì)胞水平檢測有核細(xì)胞DNA斷裂的新技術(shù)。它主要包括Olive等建立的測定DNA雙鏈斷裂的中性單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)和Singh等建立的測定DNA單鏈斷裂的堿性單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)。此技術(shù)已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于放射生物學(xué)、DNA斷裂與修復(fù)、毒理學(xué)、腫瘤**評價(jià)、細(xì)胞凋亡等領(lǐng)域的研究。
隨著SCGE技術(shù)的發(fā)展，可測量的指標(biāo)也越來越多，而且更準(zhǔn)確。目前，用于SCGE分析的指標(biāo)主要分為四類，包括形狀指標(biāo)、距離指標(biāo)、強(qiáng)度指標(biāo)和矩類指標(biāo)。其中形狀指標(biāo)有彗星細(xì)胞率；距離指標(biāo)包括彗星尾長、彗星全長、彗星頭部半徑、尾部半徑；強(qiáng)度指標(biāo)包括頭部DNA百分含量、尾部DNA百分含量、頭部面積、尾部面積等；矩類指標(biāo)包括尾矩、Olive尾矩等。
新近研發(fā)的彗星分析軟件（Comet Assay Software Project, CASP）是一套僅用分析的獨(dú)立版本軟件，可以對用戶獲得的彗星試驗(yàn)圖片進(jìn)行獨(dú)立分析。該軟件可以在常用電腦上運(yùn)行，界面友好，使用方便，分析速度快，可以一次同時(shí)給出*多達(dá)13個(gè)指標(biāo)，分析結(jié)果避免了人為誤差，更加客觀和準(zhǔn)確，結(jié)果可以以.txt文件直接輸出，SPSS等統(tǒng)計(jì)軟件可以直接讀取其輸出結(jié)果，便于統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，是一套非常好的免費(fèi)彗星分析研究軟件。下面我們通過對CASP軟件的安裝及應(yīng)用情況展開CASP免費(fèi)彗星分析軟件的使用介紹。
CASP免費(fèi)彗星分析軟件的使用介紹主要包括兩部分，1、CASP軟件免費(fèi)下載安裝；2、CASP軟件使用詳細(xì)圖解。
CASP軟件免費(fèi)下載安裝:
的工作界面登錄
www.uyczabh.cn網(wǎng)站”資料下載” 單元下載CASP彗星分析軟件（免費(fèi)版）壓縮包，解壓縮后，即可看到CASP彗星分析軟件（免費(fèi)版）應(yīng)用程序，打開即可使用。
CASP軟件使用詳細(xì)圖解:
一、 這是該軟件的工作界面，注意箭頭所指的幾個(gè)按鈕，主要用這幾個(gè)按鈕工作。
二、 單擊紅色箭頭所指按鈕，即打開文件，注意圖像文件應(yīng)是TIF格式，（藍(lán)色圈定所指），按住SHIFT鍵，可以同時(shí)選定多個(gè)文件，點(diǎn)擊OK，（綠色圈定），CASP軟件就讀入了您所選的圖像文件。
三、 點(diǎn)擊view下拉菜單，選紅色箭頭所指的”result window",在分析后您就可以看到您的結(jié)果窗口，綠色箭頭所指是我做的彗星圖像。
四、 下面就可以開始分析了，分析之前*好把右側(cè)的head 和tail選中，（綠色箭頭所指，這樣可以出現(xiàn)頭、尾分明的視覺效果，如圖），在圖像分析框內(nèi)按住左鍵下拉，出現(xiàn)黃色箭頭所指的框，這個(gè)框一定要圈住整個(gè)要分析的一個(gè)彗星圖像，然后就是用到紅色圈定區(qū)域的 按鈕了，我分別做了標(biāo)號，逐一解釋：1和2：可以選前或后面的圖像進(jìn)行分析，即上一個(gè)和下一個(gè)的功能，分析完**個(gè)，當(dāng)然要選下一個(gè)分析，很簡單?。?！
3：這是分析的功能鍵，黃色箭頭所指的框圈住彗星后，點(diǎn)擊此按鈕就可以分析了。
4：每分析完一個(gè)彗星后，都要點(diǎn)擊一下它，它會(huì)把結(jié)果數(shù)據(jù)保存到結(jié)果窗口，點(diǎn)擊后，它會(huì)變灰。（這很關(guān)鍵）。
5：背景選擇按鈕，點(diǎn)擊它，框的背景會(huì)上下變化，（注意黃色箭頭所指的框，較小的框是背景框，較大的是工作框，這兩個(gè)框在分析之前是可以調(diào)整的，一般工作框要大于背景框。
6：正式分析前一定要點(diǎn)擊它，否則沒有結(jié)果，如果不點(diǎn)擊它，只是預(yù)分析狀態(tài)，在這種狀態(tài)下，可以把分析條件調(diào)好，然后進(jìn)入正式分析，點(diǎn)擊它后，此鈕上會(huì)出現(xiàn)一斜杠。（如圖）。
藍(lán)色箭頭所指區(qū)域是分析后的曲線，主曲線是單峰，如果是雙峰，就是凋亡細(xì)胞。曲線圖下面列舉了幾個(gè)數(shù)據(jù)，不全，全部結(jié)果在結(jié)果窗口。（下圖）
五、 分析過程中或分析完成后，都可以看您的 result窗口，如圖，將圖像分析窗口*小化（紅色箭頭），就顯示出結(jié)果窗口（綠色箭頭），從左到右依次是文件名（name)和分析的各個(gè)指標(biāo)。
六、 分析完成后，別忘了輸出結(jié)果，點(diǎn)file下拉菜單，選紅色箭頭所指區(qū)域的“輸出結(jié)果”，將會(huì)出現(xiàn)第七步的圖像。
七、 選輸出結(jié)果后，出現(xiàn)如下的結(jié)果輸出窗口，（黃**域），先建立一個(gè)文件夾用于保存您的結(jié)果文件，也就是給您的結(jié)果安個(gè)窩，呵呵，好了，給您的文件取個(gè)名字吧，別忘了它的擴(kuò)展名是.txt，點(diǎn)擊OK！
八、 找到您保存的結(jié)果文件，我剛才保存的是1.txt，打開看看，結(jié)果好像有點(diǎn)亂，怎么辦？且看下回分解。
九、 沒關(guān)系，把結(jié)果稍微調(diào)整一下就好看了，（要把結(jié)果直接轉(zhuǎn)入SPSS統(tǒng)計(jì)軟件分析，必須做調(diào)整！?。。?。調(diào)整文本框的寬度（綠色箭頭處），把分析的指標(biāo)都放到**行，可是各個(gè)指標(biāo)的英文單詞比較長，簡化一下，如：taillength 變成tl，cometlength變成cl，紅色圈定區(qū)，我不再一一贅述。調(diào)整后，左側(cè)就是圖像的name，向右依次是各個(gè)指標(biāo)的數(shù)據(jù)，注意?。?！各個(gè)指標(biāo)名和數(shù)據(jù)之間一定要有空格相隔！??！否則無法轉(zhuǎn)入SPSS統(tǒng)計(jì)軟件！
十、 后面的工作就是如何使用SPSS統(tǒng)計(jì)分析了，DXY好像有專門板塊介紹，我就不說了，如有疑問再做解釋。
十一、 附凋亡細(xì)胞分析圖像.jpg