急性吸入暴露染毒實(shí)驗(yàn)(Acute Inhalation Toxicity),是所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在短時(shí)間(24h內(nèi))持續(xù)吸入一種可吸入性受試樣品后,在短期內(nèi)出現(xiàn)的健康損害效應(yīng)。由于短時(shí)間內(nèi)即可觀察到動(dòng)物的毒性反應(yīng)或致死情況,為后續(xù)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)提供了重要的參考,在化學(xué)物質(zhì)的毒性鑒定或動(dòng)物模型的建立中都有著重要作用。 適用范圍
適用于各種氣體、揮發(fā)性物質(zhì)或氣溶膠/顆粒物等化學(xué)品的急性吸入毒性鑒定;
適用于各種毒性物質(zhì)動(dòng)物毒性效應(yīng)評(píng)價(jià),及動(dòng)物模型的建立。
實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/b>
檢測(cè)化學(xué)品對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的急性吸入毒性作用和強(qiáng)度。
為亞急(慢)性等吸入毒性試驗(yàn)提供劑量選擇的依據(jù)。
實(shí)驗(yàn)基本原則
各試驗(yàn)組動(dòng)物在一定時(shí)間內(nèi)吸入不同濃度的受試樣品,染毒濃度的選擇可通過(guò)預(yù)試驗(yàn)確定。染毒后觀察動(dòng)物的毒性反應(yīng)和死亡情況。試驗(yàn)期間死亡的動(dòng)物要進(jìn)行尸檢,試驗(yàn)結(jié)束時(shí)仍存活的動(dòng)物要處死并進(jìn)行大體解剖。
實(shí)驗(yàn)方法
1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
優(yōu)選健康成年小鼠(18g~22g)和大鼠(180g~220g),也可選用其它敏感動(dòng)物。同性別各劑量組個(gè)體間體重相差不得超過(guò)平均體重的20%。試驗(yàn)前動(dòng)物要在試驗(yàn)環(huán)境中至少適應(yīng) 3~5d時(shí)間。
2、 劑量設(shè)計(jì)
根據(jù)所選方法的要求,原則上應(yīng)設(shè)4~5個(gè)劑量組,每組動(dòng)物一般為10只,雌雄各半。各劑量組間距大小以兼顧產(chǎn)生毒性大小和死亡為宜,通常以較大組距和較少量動(dòng)物進(jìn)行預(yù)試。如果受試樣品毒性很低,也可采用一次限量法,即用20只動(dòng)物(雌雄各半),10000 mg/m3吸入2h或 5000 mg/m3吸入4h,如未引起動(dòng)物死亡,則不再進(jìn)行多個(gè)劑量的急性吸入毒性試驗(yàn)。
3、染毒:口鼻式吸入暴露染毒法
口鼻式吸入暴露染毒是采用機(jī)械通風(fēng)裝置,連續(xù)不斷地將含有一定濃度受試樣品的空氣均勻不斷地送入暴露染毒腔室,經(jīng)連接到染毒腔室上呈輻射狀小動(dòng)物固定器,把染污氣體或各種氣溶膠暴露到小動(dòng)物呼吸道,實(shí)現(xiàn)動(dòng)物快速的毒性反應(yīng)或死亡(詳見
www.uyczabh.cn )。空氣交換量一般不低于
12~15次/h,并排出等量的染毒氣體,維持相對(duì)穩(wěn)定的染毒濃度(對(duì)通過(guò)染毒腔室的流動(dòng)氣體應(yīng)不間斷地進(jìn)行監(jiān)測(cè),并至少記錄2次,同時(shí)根據(jù)需求,可對(duì)染毒腔室內(nèi)的溫度、濕度、壓力、氣溶膠濃度計(jì)粒徑等參數(shù)進(jìn)行監(jiān)測(cè))。一次吸入性染毒2h。當(dāng)受試化合物需要特殊要求時(shí),應(yīng)用其它的氣流速率。染毒時(shí),染毒腔室內(nèi)應(yīng)確保至少有19%的氧含量和均衡分配的染毒氣體。一般情況下,為確保染毒腔室內(nèi)空氣穩(wěn)定,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體積不應(yīng)超過(guò)染毒腔室體積的5%。且染毒腔室內(nèi)應(yīng)維持微弱的負(fù)壓,以防受試樣品泄露污染周圍環(huán)境。同時(shí),應(yīng)注意防止受試樣品爆炸。3.1 受試樣品氣化(霧化)和輸入的常用方法:
3. 1.1 氣體受試樣品:經(jīng)流量計(jì)與空氣混合成一定濃度后,直接輸人染毒腔室;
3.1.2 VOCs:通過(guò)空氣鼓泡或適當(dāng)加熱促使揮發(fā)后輸人染毒腔室;
3.1.3 液體物質(zhì):可采用二流相霧化(使用含活性物質(zhì)的樣品)或超聲霧化器使其霧化后輸入染毒腔室;
3.1.4 香煙煙霧:科研用全自動(dòng)香煙發(fā)生器,必須具有模擬人類吸煙方式的抽吸模式;
3.1.4 顆粒物質(zhì):采用顆粒物發(fā)生器或納米發(fā)生器生成所需粒徑的氣溶膠。
4 觀察期限及指標(biāo)
4.1 觀察并記錄染毒過(guò)程和觀察期內(nèi)的動(dòng)物中毒和死亡情況。觀察期限一般為14d,觀察指標(biāo)見附錄1-A,LC50的計(jì)算見附錄1-B。
4.2 對(duì)死亡動(dòng)物進(jìn)行尸檢。觀察期結(jié)束后,處死存活動(dòng)物并進(jìn)行大體解剖,如有必要,進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。
5 試驗(yàn)結(jié)果評(píng)價(jià)
評(píng)價(jià)試驗(yàn)結(jié)果時(shí),應(yīng)將LC50與觀察到的毒性效應(yīng)和尸檢所見相結(jié)合考慮,LC50值是受試樣品急性毒性分級(jí)和標(biāo)簽標(biāo)識(shí)以及判定受試樣品經(jīng)呼吸道吸入后引起動(dòng)物死亡可能性大小的依據(jù)。引用LC50值時(shí)一定要注明所用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的種屬、性別、染毒方式及時(shí)間長(zhǎng)短、觀察期限等。評(píng)價(jià)應(yīng)包括動(dòng)物接觸受試樣品與動(dòng)物異常表現(xiàn)(包括行為和臨床改變、大體損傷、體重變化、致死效應(yīng)及其它毒性作用)的發(fā)生率和嚴(yán)重程度之間的關(guān)系。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果的解釋
通過(guò)LC50的測(cè)定,可評(píng)價(jià)受試樣品的急性吸入毒性及其毒性分級(jí),或通過(guò)解剖等進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)毒性物質(zhì)的毒性效應(yīng)。一般情況,急性吸入暴露染毒實(shí)驗(yàn)僅用于毒性鑒定或毒性效應(yīng)評(píng)價(jià)的實(shí)驗(yàn)初始設(shè)計(jì)階段,進(jìn)一步的評(píng)價(jià)還需慢性暴露染毒實(shí)驗(yàn)或細(xì)胞或分子水平暴露染毒實(shí)驗(yàn)等諸多驗(yàn)證。